Pembersihan Total DNA dari RNA dan Residu Sel

Efendi

  1. Total DNA dilarutkan dengan 200 ul H2O dalam eppendorf tube
  2. Tambahkan RNase sebanyak 20 ul kedalam eppendoft tube
  3. Inkubasikan pada suhu 37oC selama 30 menit.
  4. Tambahkan phenol chloroform (1:1) sebanyak 200 ul
  5. Sentrifugasi pada 15000 rpm (suhu kamar) selama 10 menit, sehingga terpisah menjadi 3 bagian, yang teratas adalah DNA
  6. Ammbil DNA dengan pipet, hanya bagian teratas saja, jangan sampai terambil bagian lainnya.
  7. DNA dimasukkan ke eppendoft tube yang baru (steril)
  8. Ditambahkan NaOAc sebanyak 20 ul kedalam eppendorf tube
  9. Kemudian segera diikuti dengan penambahan Ethanol sebanyak 750 ul
  10. DNA disimpan dalam Freezer dengan suhu -80oC selama 10 menit
  11. Sentrifugasikan pada suhu -4oC selama 15 menit
  12. Buang bagian cairannya(ethanol), hingga tinggal pellet DNA
  13. Tambahkan 70% ethanol sebanyak 500 ul
  14. Sentrifugasikan pada suhu -4oC selama 5 menit
  15. Buang bagian cairannya(ethanol), hingga tinggal pellet DNA
  16. Keringkan pada suhu kamar sekitar 30 menit.
  17. Keringkan secara vacum selama 5 menit
  18. Tambahan H2O steril sebanyak 100 ul
  19. Larutkan dengan mixer goyangan secara perlahan
  20. Simpan pada suhu -20oC sebagai stok yang siap digunakan untuk berbagai analisis
 
[Informasi Global] [Biosistematik dan Biodiversiti] [Koleksi dan Konservasi Plasma Nutfah] [Rekayasa Genetik dan Pemuliaan Tanaman] [Manual Laboratorium] [Kehutanan dan Pelestariaan Alam] [Photo Gallery] [Related Links]
Contact: efendi@ige.tohoku.ac.jp